第三节 电泳法
熟悉电泳法的基本原理和常用的电泳方法。
了解毛细管电泳法的基本原理。
一、基本原理
电泳迁移速度 ν=μE
在相同电场强度下,两组分分离程度取决于二者淌度之差。电泳分离后各组分的相对位置由组分的电泳泳动和缓冲液电渗共同决定。
影响电泳分离的条件包括:
1.缓冲液的pH值和离子强度:pH直接影响组分的荷电情况,是电泳分离的最重要条件。离子强度太小则缓冲容量不足,区带易扩散;太大则组分移动慢,发热严重。
2.电场强度:电场强度越大分离越完全,大于20V/cm时发热严重。
3.样品浓度:通常以1%为宜。太浓拖尾,太稀测定结构精密度差。
二、各类电泳法
1.纸电泳法 2.醋酸纤维素电泳法 3.琼酯糖凝胶电泳法 4.聚丙烯酰胺凝胶电泳法 5.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法
三、毛细管电泳法
以弹性石英毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,依照样品中各组分之间淌度和分配行为的差异而实现分离的方法。
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