第三节 氨基酸的理化性质
一、两性解离与等电点
1.等电点(isoelectric point, pI):在某一pH环境中,氨基酸解离成阳性离子及阴性离子的趋势相等,所带净电荷为零,在电场中不泳动。此时,氨基酸所处环境的pH值称为该种氨基酸的等电点(pI)。
2.带电状态判定
pI-pH < 0 …………… 带负电
pI-pH > 0 …………… 带正电
pI-pH= 0 …………… 不带电
3.等电点计算
(1)侧链为非极性基团或虽为极性基团但不解离的氨基酸:pI=½(pK1+pK2)
(2)酸性氨基酸(Glu、Asp)及Cys:pI=½(pK1+pKR)
(3)碱性氨基酸(赖、精、组):pI=½(pK2+pKR)
二、光学性质
1.旋光性质
除Gly之外,其余蛋白质氨基酸都有手性碳原子,都具有旋光性。
2.紫外吸收
Trp、Tyr、Phe 含芳香环共轭双键系统,最大吸收峰分别在 279nm、278nm、259nm。
一般地,蛋白质最大光吸收在280nm处—紫外分光光度法测蛋白含量。
三、重要的化学反应
1.茚三酮反应
在弱酸性条件下,α-氨基酸与茚三酮共热,生成紫色化合物,最大光吸收570nm,Pro的茚三酮反应呈黄色。最大光吸收440nm。
2.Sanger反应(缺反应式图)
在弱碱溶液中,氨基酸的α-氨基与2,4-二硝基氟苯(DNFB) 反应,生成黄色的二硝基苯氨基酸(DNP-AA)。此反应最初被Sanger 用于测定肽链N-末端氨基酸。
3.Edman反应(缺反应式图)
在弱碱溶液中,氨基酸的α-氨基与PITC反应,生成苯氨基硫甲酰衍生物,后者在硝基甲烷中与酸作用环化,生成PTH衍生物。