1.(2016·洛阳市考前练习四)为从土壤中筛选能有效降解有机化合物X的细菌研究人员用化合物X、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功地筛选出能高效降解化合物X的细菌(目的菌)。下图是从土壤中筛选出该细菌的过程示意图下表是分离纯化的结果。请回答下列问题：记录项目：透明圈直径/菌落直径菌落编号 1 2 3小时 1.6 2.8 3.0小时 2.2 1.2 5.0小时 2.3 1.2 4.2(1)培养基中的有机化合物X主要为目的菌提供________等营养要素。从土壤中富集能有效降解有机化合物X的细菌时应选用________(填“固体”或“液体”)培养基。(2)配制成10-1浓度稀释液时用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1 mL移入盛有________无菌水的试管中并依次配制10-2-10-10的梯度稀释液。(3)在分离、纯化过程中图中②、③过程接种的方法分别为________在倒平板前应对玻璃器皿和培养基灭菌灭菌方法是________________________________________________________________________。(4)分析菌种的分离纯化结果应选择________号菌落进行扩_______________________________________________。(5)实验过程中还需配制空白培养基作为对照其目的是。
答案 (1)碳源(或氮源、碳源) 液体(2)9
(3)稀释涂布平板法、平板4)3 透明圈直径/菌落直径越大降解化合物X的能力越强(5)检验培养基和平板的灭菌是否合格解析 (1)由于用化合物X、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功地筛选出能高效降解化合物X的细菌(目地菌)所以该培养基为选择培养基。由于微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源和生长因子所以化合物X为目的菌提供碳源和氮源等营养要素。从土壤中富集能有效降解有机化合物X的细菌时应选用液体培养基。(2)进行梯度稀释时配制成10-1浓度稀释液时用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1 mL移入盛有9 mL无菌水的试管中并依次配制10-2-10-10的梯度稀释液。(3)据图分析的菌落均匀是稀释涂布平板法接种的平板上有明显的划痕是平板划线法接种。对玻璃器皿和培养基灭菌需要使用高压蒸汽灭菌法灭菌。(4)据表分析号菌落的透明圈直径/菌落直径最大降解化合物X的能力最强所以应该使用3号菌落进行扩大生产。(5)实验中空白培养基培养的目的是作为对照实验以检验培养基和平板的灭菌是否合格。2.(2016·九江市二模)我国粮产区产生的大量的作物秸秆科技工作者研究出利用秸秆生产燃料酒精的技术大致流程为(以玉米秸秆为例)：
(1)玉米秸秆预处理后应该选用特定的酶进行水解使之转化为发酵所需的葡萄糖。从以下哪些微生物中可以提取到上述的酶?( )酿制果醋的醋酸菌 B.生长在腐木上的霉菌制作酸奶的乳酸菌 D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌(2)若要从土壤中分离生产这种酶的微生物所需要的培养基为________(按功能分)培养基中的碳源为________。对培养基进行灭菌应该采用的方法是____________________________________________________________________。(3)某同学对这种微生物培养液进行数量测定在稀释倍数为10对应的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4那么每毫升样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)________。(4)用这种方法测定密度实际活菌数量要比测得的菌落数量多原因是_______________________________________________。(5)上述流程图中发酵阶段需要的菌种是________生产酒精要控制的必要条件是______________________________________。答案 (1)B(2)选择培养基 纤维素 高压蒸汽灭菌法(3)1.17×107
(4)当两个或多个细胞连在一起时、繁殖成一个菌落平板上观察到的是一个菌落(5)酵母菌 解析 (1)生长在腐木上的霉菌、生长在落叶堆中的蘑菇及反刍动物瘤胃中生存的某些微生物中含有纤维素酶故选B项。(2)筛选目的微生物需要使用选择培养基培养基中的碳源为纤维素培养基需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌。(3)根据题意可知每毫升样品中的菌落数是23.4×10=1.17×10。(4)用稀释涂布平板法进行微生物计数时当两个或多个细胞连在一起时平板上观察到的是一个菌落所以实际活菌数量要比测得的菌落数量多。(5)上述流(2016·北京市东城区二模)分离筛选降解纤维素能力强的微生物对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义。研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株并对筛选出的菌株进行了初步研究。(1)对培养基进行灭菌的常用方法是________。为在培养基表面形成单个菌落若以接种环为工________法进行接种。(2)先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株。再将初筛菌株接种到以 为唯一碳源的培养基培养2-5天加入________溶液后依据出现的颜色反应进行筛选观察菌落特征并测量________。同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中恒温振荡培养8天观察滤纸条的破损情况。结果见表。由表可知种菌株中1、3、7号菌株产酶能____________________________。菌株编号检测指标 1号 2号 3号 4号 5号 6号 7号 8号 D滤纸破损 +++++ +++ +++++ ++ ++++ +++++ ++注：①D=(D/d)其中d表示菌落直径(cm)表示水解圈直径(cm) ②“+”为滤纸边缘膨胀++”为滤纸整齐膨胀并弯曲+++”为滤纸不定形++++”为成团糊状+++++”为半清状(3)为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果。分别用这三种菌株对秸秆进行处理并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定。结果见图。
由图分析可________的降解最强与第5天结果相比第10天秸秆各组分中________的降解率变化最大。整体分析________号菌株的降解效果最好。答案 (1)高压蒸汽灭菌 平板划线(2)纤维素 刚果红 透明圈直径与菌落直径 此三种菌株透明圈直径与菌落直径的比都较高且滤纸片破损程度高(3)半纤维素 纤维素 7解析 (1)对培养基进行灭菌的常用方法是高2)分离筛选出能高效降解纤维素的菌株时培养基中应以纤维素为唯一碳源的培养基;鉴别纤维素分解菌时需要加入刚果红染液当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。由表可知种菌株中1、3、7号三种菌株透明圈直径与菌落直径的比都较高且滤纸片破损程度高表明这些菌株产酶能力较强。(3)分析柱形图可知三种菌株对半纤维素的降解最强;与第5天结果相比第10天秸秆各组分中纤维素的降解率变化最大。整体分析号菌(2016·广州市考前训练)回答下列有关微生物培养和分离的问题。(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、________、________四类培养基配制时灭菌与调pH的先后顺序是________。(2)若要测定培养液中微生物B的菌体数可在显微镜下用________直接计数;________法进行计数。(3)为了调查某河流的水质状况某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量并进行了细菌的分离等工作。该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间这样做的目的是________________________________________________________________________。(4)为了将分离到的菌株纯化挑取了菌落在3块相同平板上划线结果其________________________________________________________________________。(5)玉米秸秆中的纤维素可被某些微生物分解分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶该酶是由3种组分组成的复合物其中的葡萄糖苷酶可将________分解成葡萄糖在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时可与纤维素形成________色复合物。用含有CR的该种培养________。答案 (1)氮源和无机盐 先调pH后灭菌(2)血细胞计数板 稀释涂布平板(3)检测培养基平板灭菌是否合格(4)接种环温度过高菌被杀死(5)纤维二糖 红 透明圈解析 (1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、氮源、无机盐四类培养基配制时基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤。(2)若要测定培养液中微B的菌体数可在显微镜下用血细胞计数板直接计数;若要测定其活菌数量可选用稀释涂布平板法进行计数。(3)采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量在涂布接种前随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。(4)三块平板有两块平板长有菌落说明含有菌株并可在培养基上生长;而其中一块未见菌落说明菌株死亡。因此应是接种过程中接种环灼烧后未冷却或未足够冷却使菌株因温度过高被杀死。(5)纤维素酶是一种复合酶一般认为它至少含有三种组分即C酶、C酶、葡某同学利用自己所学的生物技术自制酸奶实验方案如下：材料用具：纯牛奶、原味酸钠;带盖瓶子、勺子、可调温电饭锅。制作方法：将瓶子(连同盖子)、勺子放在电饭锅中加水煮沸10分钟瓶子稍冷却后向瓶子中倒入牛奶再放入电饭锅中沸水浴加热10分钟待牛奶冷却至40 ℃左1/5的酸奶作“引子”用勺子搅拌均匀拧紧瓶盖将电饭锅温度调至40 ℃继续保温7-8小时请回答：(1)将瓶子等煮沸的目的是___________________________。(2)“引子”指的是酸奶中的________其在发酵过程中完成的主要化学反应是________(填反应式)。与该菌种比较醋酸菌的代谢特点是____。(3)牛奶冷却后才能导入“引子”的原因是__________________将瓶盖拧紧是为了保持________条件。(4)适量饮用酸奶有利于改善腹胀、消化不良等症状其原理是酸奶中的微生物能分解消化道中的部分食物且________。(5)另一名同学在重复相同实验时为避免杂菌污染向牛奶中加入了青霉素结果发酵失败原因是______________________________________________________________________________。答案 (1)对瓶子进行灭菌防止杂菌污染(2)乳酸杆菌 C(乳酸)+能量 醋酸菌是好氧细菌(3)防止温度过高杀死菌种 无氧(4)不产生气体(5)青霉素能抑制乳酸杆菌的增殖解析 (1)2)“引子”是乳酸(杆)菌其无氧呼吸可以产生乳酸化学反应是C(乳酸)+能量。乳酸菌是厌氧型细菌而醋酸菌是好氧型细菌。(3)为了防止温度过高而将菌种杀死所以冷却后才能倒入酸奶;乳酸菌是厌氧型细菌在无氧条件下才能进行发酵所以要将瓶盖拧紧。(4)适量饮用酸奶有利于改善腹胀、消化不良等症状其原理是酸奶中的微生物能分解消化道中的部分食物且不产生气体。(5)青霉素能抑制有机农药苯磺隆是一种除草剂长期使用会污染环境。研究发现苯磺隆能被土壤中某些微生物分解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。
(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、________四类该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源其原因是________________________________________________________________________。(2)与微生物培养基相比植物组织培养的培养基常需添加生长素和________这些植物激素一般需要事先单独配制成________保存备用。(3)纯化菌株时通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌第二划线区域所划的第一条线上无菌落其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有______________________________________________。(4)为探究苯磺隆的降解机制将该菌种的培养液过滤离心取上清液作图乙所示实验。该实验的假设是____________该实验设计是否合理?为什么?_______________________________________________________________________________________________。答案 (1)无机盐和氮源 只有能降解利用苯磺隆的菌株才能生存繁殖成菌落(2)细胞分裂素 母液(3)接种环(或接种针) 接种环在二区划线前未冷却;划线未从第一区域末端开始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质 不合理缺少空白对照解析 1)微生物的各种培养基配方一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养;选择培养基只允许特定种类的微生物生长又要抑制或阻止其他种类微生物生长因而必须以苯磺隆为唯一碳源只让目的菌株生存繁殖。(2)植物组培过程中启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素是生长素和细胞分裂素;为了避免每次配制时都要称量可将激素类先配成母液。(3)纯化菌株时通常使用的划线工具是接种环(或接种针);接种环在平板内的每一次划线前都要先灼烧灭菌冷却后划线而且要从上一次划线末端而非空白处划线不冷却会烫死上次划线末端菌株从空白4)从图乙上清液中加入蛋白酶溶液可知是用于水解上清液中的某蛋白质的由此可判定实验假设是目的菌株通过分泌某种蛋白质来降解苯磺隆但是尚需设置不加入蛋白酶的对照组实验否则没有说服力因而不合理。(2016·菏泽市二模)[生物——选修1：生物技术实践]蓝莓富含花青素等营养成分具有保护视力、软化血管、增强人体免疫力等功能。请回答下列用蓝莓制作果酒和果醋的有关问题：(1)制酒中利用的微生物是________。发酵开始时一般要先通气其目的是________。制酒过程中可在酸性条件下用橙色的重铬酸钾检测酒精的存在检验后颜色变成________。(2)醋酸菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源________(填“充足”或“缺少”)。酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中会逐渐出现醋酸味尤其是气温高的夏天更易如此其原因是____________________。(3)酿制蓝莓果酒时不需要对蓝莓进行严格的消毒处理这是因为在缺氧、呈酸性的发酵液中___________________________________。(4)为鉴定蓝莓果酒是否酿制成功除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外还可以通过检测________作进一步的鉴定。答案 (1)酵母菌 酵母菌可在有氧条件下大量繁殖 灰绿色(2)缺少 醋酸菌是好氧细菌最适生长温度为30-35 ℃(夏天温度较高导致醋酸杆菌大量生长产生醋酸)(3)绝大多数微生物无法适应这一环境而受抑制(4)发酵前后的pH解析 (1)果酒制作利用的是酵母菌的无氧呼吸。实验开始前先通入氧气促进酵母菌有氧呼吸大量繁殖。产生的酒精可以与橙色的重铬酸钾在酸性条件下产生灰绿色。(2)在糖源不足的情况下30-35 ℃所以酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中会逐渐出现醋酸味。(3)在缺氧、呈酸性的发酵液中绝大多数微生物无法适应这一环境而受抑制所以酿制蓝莓果酒时不需要对蓝莓进行严格的消毒处理。(4)酿酒是否成功可以通过观察菌膜、尝、嗅还可以检测发酵前后的pH。(2016·汉中市二模)汉中城乡有泡泡菜的习惯其制作方法是：新鲜的蔬菜经过整理、清洁后放入彻底清洗并用白酒擦拭28-30 ℃。但有时制作的泡菜会“咸而不酸”或“酸而不咸”据此分析回答下列问题。(1)用白酒擦拭泡菜坛的目的是________。若制作的泡菜“咸而不酸”最可能的原因是_____________________________________。(2)制作过程中需要加入盐水其中清水与盐的比例应为____加入“陈泡菜水”的作用是__________________________________。(3)若要获得优良乳酸菌菌种应选用培养基培养。培养基中应含有________、________水和无机盐同时需要在培养基中添加维生素。纯化菌种时为了得到单菌落常采用的接种方法是________________________________________________________________________。答案 (1)消毒 盐过多抑制了乳酸菌发酵(2)4∶1 提供乳酸菌菌种(3)碳源 氮源 平板划线法或稀释涂布平板法解析 (1)制作泡菜时所用的泡菜坛要用白酒擦拭消毒防止杂菌污染。如果泡菜盐水浓度过高乳酸菌会通过渗透作用失水这样就抑制了乳酸菌生长会使制作的泡菜“咸而不酸”。(2)制作泡菜时泡菜盐水的浓度是水与盐的比例应为4：1;陈泡菜水中含有乳酸菌因此制作泡菜3)培养微生物所用的培养基应含有碳源、氮源、水和无机盐等。接种微生物常用平板划线法或稀释涂布平板法。
