四、肠球菌属
1.生物学特性:肠球菌为G+,呈单个、成双或短链状排列,无芽胞,无荚膜,营养要求较高,在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、圆形菌落,并伴有α或不溶血现象。能在高盐、高碱条件(pH9.6),高胆汁(40%)培养基上和10~45~C的环境下生长。触酶阴性,胆汁七叶苷水解、万古霉素敏感性及吡咯烷基芳基酰胺酶均为阳性。
2.临床特征:肠球菌所致的感染中最常见为尿路感染,而其中绝大部分为院内感染,亦是引起老年人和严重基础疾病患者败血症的常见病原菌。近年来肠球菌耐药菌株及其所致的感染率增加。
3.微生物检验
(1)标本的采集:根据病种的不同,可采集尿液、血液及脓性分泌物等标本。
(2)检验程序及方法:
1)直接涂片:可见单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰阳性球菌。
2)分离培养:用血平板或选择性培养基,如叠氮胆汁七叶苷琼脂进行分离培养,该培养基可抑制革兰阴性杆菌的生长,而长出的肠球菌菌落为黑色,便于识别。
3)鉴定:主要试验有
①PYR试验。本法是一种快速筛选鉴定试验。用于鉴定能产生吡咯烷基芳基酰胺酶的细菌,如肠球菌、链球菌属中的化脓性链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。
②胆汁一七叶苷试验。D群链球菌和肠球菌能在含有胆盐的培养基中水解七叶苷,其生成物与铁离子反应生成黑色化合物,97%的肠球菌在24h培养后呈阳性反应,72h后100%为阳性。但本法不能区别肠球菌和非肠球菌,进一步鉴定需做盐耐受试验。
③盐耐受试验。肠球菌能在含6.5%NaCl的心浸液肉汤中生长,本法结合胆汁-七叶苷试验可鉴定肠球菌。
五、奈瑟菌属
1.脑膜炎奈瑟菌
(1)生物学特性
①形态与染色:为革兰阴性双球菌,菌体呈肾形,成对排列,新分离的菌株有荚膜和菌毛,无芽胞,无鞭毛。
②培养特性:营养要求高,最适温度为37~C,最适pH为7.4~7.6。在巧克力平板上菌落为蓝灰色、半透明、光滑、湿润、扁平、边缘整齐呈露滴状;在血平板上菌落不溶血,无色素;卵黄双抗(EPV)培养基菌落为无色,较大且光滑、湿润、扁平,边缘整齐等。
③生化反应:绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气(因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖,借此与之鉴别)。
④抗原及分型:根据群特异性荚膜多糖抗原不同,将该菌分为13个血清群,其中H、I、K血清群是由我国发现的,我国流行的菌株以A群为主。
⑤抵抗力:抵抗力弱,对干燥、热、寒冷、紫外线、消毒剂等均十分敏感。对磺胺类、青霉素、链霉素均很敏感。
(2)临床特征
①致病物质:主要有内毒素、荚膜和菌毛。
②所致疾病及临床表现:本菌主要引起流行性脑脊髓膜炎,传染源是病人和带菌者,经飞沫传播,主要临床症状为脑膜刺激征,严重者可死亡,病死率极高。
③免疫性:病后可产生群特异性抗体,但不持久。
(3)微生物检验
1)标本采集:根据临床病程采集不同标本。采集的标本应立即送检或用血平板进行床旁接种后立即孵育。
2)检验程序及方法:
①直接涂片检查:取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片,干燥固定后革兰染色或美蓝染色镜检,若发现中性粒细胞内(或胞外)革兰阴性双球菌,呈肾形成对排列,可初步报告。
②分离培养:增菌后接种于巧克力琼脂或EPV琼脂,置5%~10%CO2环境中培养后观察菌落,取可疑菌落涂片,并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。
③鉴定:通过直接凝集试验鉴定血清型别,及氧化酶、糖类发酵和触酶试验等生化反应作出鉴定。总之,如直接镜检形态为革兰染色阴性双球菌时可初步报告,经分离培养后见菌落特征典型、分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸,氧化酶试验阳性、血清凝集试验阳性,即可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。
2.淋病奈瑟菌
(1)生物学特性:本菌的形态常呈球形或肾形,成对排列,形似咖啡豆,革兰阴性。新分离的菌株可有荚膜和菌毛,无芽胞和鞭毛。需氧生长,营养要求较高,只能在巧克力琼脂培养基中生长,初次分离时须在5%~10%CO2环境下培养,可形成灰白色的菌落。本菌只分解葡萄糖,产酸不产气,氧化酶和触酶试验阳性。抵抗力弱,对消毒剂敏感,对青霉素、磺胺等抗生素敏感,但是耐药菌株逐渐增多。
(2)临床特征:致病物质有菌毛、外膜蛋白、IgAl蛋白水解酶、LPS等,主要引起人类淋病,是我国目前流行的发病率最高的性病,主要通过性接触而感染泌尿生殖道、口咽部和肛门直肠的黏膜,并可播散至全身。若母亲患有淋病时,婴儿出生时可感染导致淋菌性结膜炎。病后虽产生相应的细胞免疫和体液免疫,但免疫力弱,不足以保护再感染。
(3)微生物检验
1)标本采集:主要取泌尿生殖道脓性分泌物或眼结膜分泌物,全身淋病可取血液,采集后立即送检。
2)检验程序及方法:
①直接涂片检查:革兰染色后镜检若发现中性粒细胞内有革兰阴性双球菌,结合症状可初诊。
②分离培养:细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病病人的惟一方法。常用的分离培养基为巧克力平板。接种后置于5%~10%CO。环境中培养后观察菌落,取可疑菌落进行涂片镜检,并作生化试验予以鉴定。
例题:
1.SPA 存在于:
A.所有的葡萄球菌表面
B.化脓性球菌表面
C.90%以上金黄色葡萄球菌表面
D.表皮葡萄球菌表面
E.产肠毒素的葡萄球菌表面
2.鉴定葡萄球菌致病性的重要指标是:
A.产生溶素
B.产生血浆凝固酶
C.产生色素
D.具有 SPA
E.发酵葡萄糖
3.关于 SPA,下列哪一项是错误的?
A.为金黄色葡萄球菌表面的蛋白质抗原
B.为所有的葡萄球菌都具有的一种结构
C.能与人类 IgG 的 Fc 段结合
D.具有抗吞噬作用
E.与协同凝集相关
参考答案
1.C 2.B 3.B