①使目的基因与载体相结合
②将目的基因导入受体细胞
③验证目的基因的表达是否符合特定性状要求
④提取目的基因
A、③②④①
B、②④①③
C、④①②③
D、③④①②
解析：选C。在基因工程操作中，首先要提取目的基因，然后使目的基因与载体结合，再将目的基因导入受体细胞，最后是目的基因的检测与表达。
2、以下猎取目的基因的方法中需要模板的是()
①从基因文库中猎取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成DNA
A、①②③④
B、①②③
C、②③④
D、②③
解析：选D。PCR技术利用的是DNA双链复制原理。马上DNA双链之间的氢键打开，变成单链DNA，作为聚合反应的模板。反转录法是以目的基因转录成的信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下，先反转录形成互补的单链DNA，再合成双链DNA。①④那么均不需要模板。
3、聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述30多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性(引物与DNA模板链结合)→72℃下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。以下有关PCR过程的表达中不正确的选项是()
A、变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现
B、复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原那么完成
C、延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D、PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高
解析：选C。此题考查PCR扩增过程。解题的关键是要全面理解PCR扩增过程。DNA分子被破坏是指DNA分子被解旋成两条长链，破坏的部位是连接两条长链之间的氢键，方法有多种，用解旋酶、高温等都可使DNA解旋。B项中引物有两种，分别与模板DNA链3′端的互补序列互补配对。C项中的原料不正确，合成DNA的原料是四种脱氧核苷酸。PCR技术中DNA合成过程中的温度在70～75℃。
4、以下关于基因表达载体构建的相关表达，不正确的选项是()
A、需要限制酶和DNA连接酶
B、必须在细胞内进行
C、抗生素抗性基因可作为标记基因
D、启动子位于目的基因的首端
解析：选B。基因表达载体构建是目的基因与载体结合，在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体，用DNA连接酶将相同的末端连接起来;基因表达载体的构建是在细胞外进行的;基因表达载体包括启动子(位于基因首端使转录开始)、终止子、目的基因和标记基因(鉴别受体细胞中是否含有目的基因，如抗生素抗性基因)。
5、我国中科院上海生化所合成了一种具有镇痛作用而又可不能像吗啡那样使病人上瘾的药物——脑啡肽多糖(类似于人体中的糖蛋白)。在人体细胞中糖蛋白必须通过内质网和高尔基体的进一步加工才能形成。假如要采纳基因工程和发酵工程技术让微生物来生产脑啡肽多糖，应该用以下哪种微生物作受体细胞()
A、大肠杆菌
B、酵母菌
C、T4噬菌体
D、大肠杆菌质粒
解析：选B。脑啡肽多糖的化学本质类似于人体中的糖蛋白。从题中能够看出，糖蛋白的合成必须通过内质网和高尔基体的进一步加工，内质网和高尔基体只存在于真核生物的细胞内，大肠杆菌是原核生物，只有核糖体，没有内质网和高尔基体，T4噬菌体属于病毒，没有细胞结构，自己不能合成蛋白质;酵母菌是真核生物，其细胞中有内质网和核糖体，能够合成糖蛋白。
6、上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高了30多倍，标志着我国转基因研究向产业化的目标又迈进了一大步。以下与此有关的表达中，正确的选项是()
A、人白蛋白基因开始转录时，在DNA聚合酶的作用下以DNA分子的一条链为模板合成mRNA
B、所谓“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因
C、人们只能在转基因牛的乳汁中猎取到人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在转基因牛的乳腺细胞中是纯合的，在其他细胞中那么是杂合的
D、假如人白蛋白基因的序列是的，能够用化学方法合成该目的基因
解析：选D。人白蛋白基因开始转录时，在RNA聚合酶的作用下以DNA分子的一条链为模板合成mRNA;所谓“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中的人白蛋白基因更多地进行转录、翻译，产生更多的人白蛋白;人们只能在转基因牛的乳汁中猎取到人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在转基因牛的乳腺细胞中表达。
7、下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答以下问题：
(1)一个图l所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。
(2)假设对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，缘故是_______
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于能够防止------。
(5)为了猎取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_____酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_______
(7)为了从cDNA文库中分离猎取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
解析：(1)该质粒为环状DNA，经SmaⅠ切割前，不含有游离的磷酸基团，经SmaⅠ切割后形成平末端，含有2个游离的磷酸基团。
(2)SmaⅠ识别的是CCCGGG序列，切割点在C与G之间，SmaⅠ酶切位点越多，也确实是C-G碱基对越多，C与G之间的氢键(3个)比A与T之间的氢键(2个)数量多，其含量越多，质粒的热稳定性越高。
(3)据图1可知，SmaⅠ切割位点在抗生素抗性基因(标记基因)中，据图2可知，SmaⅠ切割位点在目的基因中，因此使用SmaⅠ切割会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因。
(4)用同一种限制酶处理质粒和外源DNA，再用DNA连接酶连接时，往往会有三种连接形式：目的基因—质粒、目的基因—目的基因(环化)、质粒—质粒(环化)，后两种是我们不需要的，因而要进行筛选。用两种限制酶处理质粒和外源DNA，因形成的末端不同可幸免上述情况的发生。
(5)连接质粒与目的基因的工具酶是DNA连接酶。
(6)抗生素抗性基因是标记基因的一种，标记基因的作用是供重组DNA鉴定和筛选。
(7)可依照目的基因是否表达成预期的蛋白质进行目的基因的检测，此题中预期的蛋白质是蔗糖转运蛋白，因而可在蔗糖为惟一含碳营养物质的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
答案：(1)0、2(2)高
(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
(5)DNA连接
(6)鉴定和筛选含有目的基因的细胞
(7)蔗糖为惟一含碳营养物质
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