二、非选择题(共4小题)
11.生物乙醇是汽油的良好替代品，美国主要以玉米为原料生产燃料乙醇。我国则坚持“不与人争粮，不与粮争地”的原则，利用农作物废弃物——秸秆代替粮食作为原料，其主要技术流程为：
秸秆→秸秆颗粒反应罐水解压滤出渣酒精发酵蒸馏
(1)过程加入了微生物，其作用是把秸秆颗粒分解。从土壤中获取所需微生物的过程为微生物的________，选择培养基应以________为唯一碳源。纯化菌种时，将筛选获得的菌液用________法或________法接种到培养基上。
(2)酒精发酵阶段接种的微生物是________，生产酒精要控制的必要条件是__________________________________________________ ______________________。
(3)在培养微生物的过程中，对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是________、________。
解析：本题考查传统发酵技术的应用和微生物培养的相关知识。(1)从土壤中获取分解纤维素的微生物的过程称为微生物的分离。选择培养基应以纤维素为唯一碳源。纯化菌种时，将筛选获得的菌液用稀释涂布平板法或平板划线法接种到培养基上。(2)酒精发酵阶段接种的微生物为能无氧呼吸产生酒精的酵母菌。要控制的必要条件是无氧或密封，因为在有氧下，无氧呼吸受到抑制，会影响酒精产量。(3)在培养微生物的过程中，要保证无菌环境，故对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌。
答案：(1)分离 纤维素 稀释涂布平板 平板划线
(2)酵母菌 无氧或密封
(3)高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌
12.为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________;然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液;经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为________。
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是__________________。
(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。
解析：本题考查细菌的分离、培养和计数过程。(1)灭菌不彻底会影响细菌培养的结果，在培养之前可先对空白平板进行培养，看是否有杂菌生长;3个平板上的菌落数的平均值为38，则1升水样中的活菌数为38×10×100×1 000=3.8×107(个)。(2)接种细菌时，接种环要进行灼烧灭菌;平板划线法几次划线要首尾相连(注：最后一次划线不能与第一次划的起始端相连)，原因是在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌种数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，达到稀释的目的。(3)稀释涂布平板法是将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，以单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基上。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，且菌落分布均匀，B图符合这一特点。(4)液体培养基振荡时，氧气会充分混入到液体中，增加溶解氧的含量，同时使细菌与营养物质充分接触，以提高营养物质的利用率。
答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107 (2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 (3)B (4)溶解氧 营养物质
13.下列是有关微生物的培养与应用的问题，请分析回答。
(1)如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________分散到培养基的表面。图中右侧手拿的器具称为________。
(2)分析下面培养基的配方：NaNO3，KH2PO4，NaH2PO4，MgSO4·7H2O，KCl，H2O。若用于培养纤维素分解菌，应加入________物质，为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入________染料。
(3)获得的菌种如果需要长期保存，可以采用________的方法。
答案：(1)平板划线 稀释 接种环
(2)纤维素粉 刚果红
(3)甘油管藏
14.富集培养是微生物学中的最强有力的技术手段之一。主要是利用不同微生物生命活动特点的不同，制定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其数量大大增加。如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物——对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答：
(1)①→③重复培养的目的是_____________________ ___________________________________________________。
(2)的菌落中大部分是能降解________的微生物。设置的目的是_______________________________________________________。
(3)→⑥采用单细胞挑取法，将所选菌种接种到的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是接种环要________灭菌，待其________后，再挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，操作完成后需将接种环在酒精灯火焰上灼烧，目的是________________________________________________________________________。
(4)如果用这种方法分离土壤中的纤维素分解菌，经常用加入了________________的鉴别培养基，在该培养基上，纤维素分解菌会因为产生纤维素酶使菌落周围出现________________________。
解析：(1)通过重复培养可获得更多的分解对羟基苯甲酸的微生物。(2)通过培养分离获得的主要是分解对羟基苯甲酸的微生物。(3)接种微生物时要对接种环进行灼烧灭菌，待接种环冷却后再接种，接种完毕后还需对接种环灼烧以杀灭残留的微生物。(4)刚果红与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，该复合物就无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
答案：(1)扩大培养(使分解对羟基苯甲酸微生物的比例增高) (2)对羟基苯甲酸 对照作用 (3)在酒精灯火焰上灼烧 冷却 杀灭残留微生物 (4)刚果红 透明圈
